INNOVATION CENTER FOR GENE MEDICINE

충남대학교 신약전문대학원 & 대전테크노파크 바이오센터

렌티바이러스 벡터 생산

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Lentiviral/Retroviral vector
  1. 재조합 렌티바이러스벡터는 배양세포 내로 유전자를 효과적으로 전달하기 위해 가장 보편적으로 사용되는 벡터입니다.
    렌티바이러스 벡터는 genomic integration을 통해 전달하는 유전자를 세포에 영구적(stable)으로 전달할 수 있을 뿐만 아니라 ex vivo 및 in vivo 유전자 전달에도 효율적으로 사용되고 있습니다.
  2. 저희 ICGM은 렌티바이러스 기반 유전자 전달 및 치료 연구를 지원하기 위해 우수한 품질의 lentiviral vector 패키징 서비스를 제공합니다. 특히, 오랜 경험과 기술력으로 다양한 연구에 적합한 titer, purity, viability 및 consistency가 확보된 벡터를 제공합니다.
  3. 제공되는 렌티 바이러스의 종류
    • VSV-G pseudotyped 3 세대 lentiviral vector
    • 발현 벡터 플라스미드가 제공되는 경우, 다른 종류의 pseudotyped 바이러스 패키징도 가능함
서비스 규격
규모 적용 역가 및 용량 비고
Research
scale		 동물모델 in vivo > 1 x 1010 TU/mL in PBS
10 μL/tube x 10 vials 		견적 의뢰서 다운로드
Large scale
(< 10 liters)		 비임상 시험용
또는 GMP grade
(공정개발 포함)		 문의 바람 자문∙면담 의뢰서 다운로드     icgm@icgm.kr

* 단위 TU/mL (transduction unit/mL)

  1. IGCM에서는 commercial p24 ELISA kit를 사용하여 역가 산출 합니다.
  2. 렌티바이러스 벡터로 도입 되는 염기서열 길이가 4 kb 보다 작은 경우에 상기 타이터로 생산이 가능합니다. 이보다 큰 크기의 경우 바이러스에 패키징 되는 유전자의 integrity를 보장할 수 없으며, 위에 명시된 타이터를 보장할 수 없습니다.
  3. 아래 유전자를 포함한 렌티바이러스 벡터를 생산하는 경우 타이터를 보장할 수 없습니다.
    • 바이러스 패키징 과정 및 세포 혹은 바이러스의 integrity를 손상시키는 유전자 (예:세포융합 매개 단백질 등)
    • 독성 유전자
    • 반복서열이나 stem-loop 서열 (예:반복적 또는 높은 GC-리치 시퀀스)와 같은 바이러스 패키징에 부정적인 영향을 미칠 수 있는 서열)
    • 패키징 효율성에 불확실성을 초래할 수 있는 공개되지 않은 시퀀스 또는 일반적이지 않은 LTR을 포함하는 고객 제공 transfer vector plasmid
    • 고객이 제공한 gag-pol expression plasmid
    • 고객이 제공한 VSV-G expression plasmid

** 예상 소요 시간은 vector plasmids 확보한 날로부터 생산 완료까지의 시간입니다.

렌티바이러스벡터 생산, 농축 및 정제
  1. ICGM의 재조합 렌티바이러스벡터 생산의 경우, 293T 혹은 LV293 세포에 아래 플라스미드를 transient transfection 하여 진행됩니다. (the 3rd generation vector system)
    • Lentiviral (LV) transfer plasmid
    • LV gag-pol plasmid
    • LV rev plasmid
    • VSV-G plasmid
  2. in vitro grade LV vector는 PEG로 농축 후, PBS에 resuspending되어 발송됩니다.
  3. in vivo grade LV vector는 ultracentrifugation 농축 후, PBS에 resuspending되어 발송됩니다.
  4. large-scale 공정개발 및 GMP grade 생산은 기술상담을 통해 진행됩니다.
  5. ICGM은 p24 ELISA assay를 이용하여 재조합 렌티바이러스 벡터의 역가를 산출합니다.
고객이 제공하는 벡터

고객이 제공한 Lentiviral vector 플라스미드를 사용하는 생산의 경우, 아래 재료제공 지침에 따라 당사로 보내 주십시오. 고객이 제공한 모든 재료는 ICGM에 입고 후, 필수적인 QC가 진행됩니다. 고객이 공급한 재료가 QC를 통과할 때까지 생산이 시작되지 않을 수 있다는 점에 유의하시기 바랍니다.

렌티바이러스 transfer vector 구축
  1. 클로닝 서비스가 필요하신 경우 아래 의뢰서를 작성하여 보내주시기 바랍니다.
    렌티바이러스 벡터 클로닝 서비스 의뢰서 다운로드
  2. 클로닝 서비스는 고객이 정보를 알고 있는 plasmid DNA 상태에서 PCR이나 그 어떠한 조작 없이 진행하며, 최종 산물에 대한 시퀀싱은 진행하지 않습니다.
  3. 확보된 sub-clone에서 바이러스 생산성을 Integrated proviral genome 기반하여 검증(lentiviral cis-acting element target primer 이용)될 뿐, transgene이 온전하게 삽입 및 발현 여부는 검증하지 않습니다.
  4. 플라스미드 최소 200 ng/uL X 50 uL (≥ 1.8~2.0 A260/280)
렌티바이러스 벡터 생산 요청 시, ICGM에 제공되어야 할 정보 및 재료
  1. 렌티바이러스 벡터 패키징 서비스 의뢰서
  2. Transfer plasmid DNA (LTR flanked transfer plasmid)와 그의 서열 정보
    • 플라스미드 최소 200 ng/μL x 30 μL (≥ 1.8~2.0 A260/280)
    • 보내주신 플라스미드는 ICGM 내부에서 재증폭 되어 검증 후 생산에 사용됩니다.
    • 보내주신 플라스미드는 생산 의뢰한 연구자에게 재발송 되지 않습니다.
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